Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病人进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现肝细胞会诱发到显现1型式心血管疾病外科征状的的发展率在成人中后期就有来得好的描绘，多个肝细胞会诱发特征性的成人中都有70%在血清转换后10将近患上心血管疾病，而随访15年的成人这一比例减小到84%。相比之下，占多数外科1型式心血管疾病一半以上的型式1型式心血管疾病的患病机制还从未给与充分的研究工作。

越来越多的人开始用到分期系统来表述1型式心血管疾病的的发展：社会群体在显现多种肝细胞会诱发时转至第1阶段，显现血糖间歇性时转至第2阶段，显现征状时转至第3阶段。一些多发肝细胞会诱发特征性的社会群体，在1期和2期，的发展较太快，并发展为患病的1型式心血管疾病。我们以前描绘了一第三组在首次侦测到多种肝细胞会诱发比对后至少10年无心血管疾病的极太快的发展者，这第三组病患者人数少，但特征非常明确。随后，我们发现肝细胞会诱发特异性CD8+T细胞会催化在的发展快速的病患者中都基本不存在，但在全面性患病和近十年存在的心血管疾病病患者中都很更易侦测到。这或许得借助于得借助于结论，与的发展病患者相比，这些病患者诱发催化的调节加强。

最初研究工作得借助于得借助于结论，尽管调节性T细胞会(Treg)使用量正常，但心血管疾病病患者存在一些特性缺失，其中都包括对IL-2的催化技能下降。此外，心血管疾病病患者中都的现象CD4+T细胞会或许对调节来得具抵抗性，表现为现象T细胞会的抑止加强，自然产生的Treg和体外产生的诱导Treg，以及免疫个人经历的CD4+T细胞会中都IL-2催化加强。本研究工作的目的是描绘了CD4+调节性T细胞会(Treg)在一个大极快速的发展者中都的特征，他们的同期为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

步骤：BOX研究工作是一项以许多人为基础的交叉研究工作，在21岁以下确诊的病患者亲族中都检查1型式心血管疾病的危险环境因素。我们以前描绘了近十年快速的发展者的特征，他们依然多重肝细胞会诱发特征性超过10年，但从未显现心血管疾病的外科征状，太快性或非性功能诱发。随后，10名此后依然无心血管疾病并愿意提供大量血液比对的快速的发展者纳入T和B细胞会特性研究。在现阶段的研究工作中都，8名太快的发展者(SP第三组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的肝细胞会诱发特征性。所有的举例来说都依然稳定1型式心血管疾病的发展的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞会诱发对某些免疫的特征性催化，然而，一名病患者已经依然稳定2期至少6年，但从未显现外科征状，一名病患者被诊断为心血管疾病，该受试者72岁，在挖掘实验者比对时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据研究中都对该小分子展开了单独指标。裂解外周血单个核能细胞会(PBMCs)，采用多实例流式细胞会奥义和T细胞会抑止试验指标小分子中都Treg的基频、表型式和特性。用到FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和紧接)展开无监督聚类研究，指标Treg表型式。

结果：与健康小分子相比，来自太快的发展体的无意识CD4+T细胞会的监督聚类得借助于得借助于结论，激活的无意识CD4+ Treg基频减小，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表示减小有关。一名HbA1c升高的病患者与的发展快速者和匹配的对照第三组相比，Treg对光有所多种不同。特性研究得借助于得借助于结论，与健康小分子相比，来自快速的发展体的Treg介导的CD4+现象T细胞会抑止明显受损。表现为对现象CD4+T细胞会CD25和CD134表示的抑止减小。

平面图1 深入的表型式研究得借助于得借助于结论，CD4+Treg亚型式在太快的发展路由表中都减小。由FlowSOM转换成的Treg室，聚集在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据标明物表示断定借助于10个元簇:无意识T细胞会_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞会;HLA-DR + GITR +无意识T细胞会;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)用到9个多种不同Treg标明转换成的10个元簇的MST。每个节点代表一个炮兵部队(100个炮兵部队)，来得大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在节点第三组外面上色。每个节点中都的饼平面图问到单个标明的表示最高级别。(b)每个元聚类的热平面图，以得借助于得借助于结论适度标明表示。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)转换成平面图，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于稀土元素为每个metacluster装有线平面图(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP第三组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞会(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞会(l)。深蓝色白点代表这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对表示法秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 用到CITRUS的预测模型式断定，Treg基频的减小是的发展快速的标识。分级奈斯(a - f)和棉花研究(g-k)比较SP举例来说和匹配的HD举例来说在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会群体的代表性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表示展开裂解，仿真FlowSOM社会群体。(b) HD(黑点)和SP(白点)第三组以及小分子SP 606(深蓝色)中都CD25+ cd127的基频概述平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯闭包的装有线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示数值填充，记号显眼的簇被定位为SP和HD路由表密切关系的多种不同。(j)装有线平面图得借助于得借助于结论了在SP(白点)和HD(灰点)第三组中都，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对于稀土元素(比例)。(k)直方平面图得借助于得借助于结论每个簇的表型式(粉红色)和Treg标明相对于表示与历史背景表示(金色);上列，磁盘Treg_3;示例四人，磁盘Treg_4。历史背景与所有其他簇中都标明的表示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对表示法秩检验

平面图3 与健康献血者相比，的发展快速者无意识treg的GITR减小。每个无意识CD4+T细胞会元簇(无意识T细胞会_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞会;HLA-DR + GITR +无意识T细胞会;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个表示标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的表示热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR表示结合，得借助于得借助于结论直方平面图(c)和概述平面图(d)。Wilcoxon配对表示法秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有小分子包括，p< 0.05(金色)小分子SP 606和匹配的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR表示，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(深蓝色)结合，得借助于得借助于结论直方平面图(e)和概述平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对表示法秩检验

平面图4 来自快速的发展的CD4+ treg细胞会控制现象CD4+T细胞会的技能下降。SP第三组用金色的线和白点问到，HD第三组用黑色的线和白点问到，深蓝色的线/白点问到小分子sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会展开分选。CD4+CD25−(；也者)被标明为CFSE, Treg按捕捉到的比例滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞会，指导3同一天展开流式细胞会奥义侦测。(a-d)与CD4+；也者相对于应的treg指导(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者指导。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE抑止比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止比例。用到特征性对照(激活的号召细胞会分别为treg)计算借助于来抑止比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 现象CD4+T细胞会对快速的发展的T细胞会酪氨酸的抑止来得极端。SP第三组用金色的线和白点问到，HD第三组用黑色的线和白点问到，深蓝色的线/白点问到小分子sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会展开分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标明，treg按捕捉到的比例滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞会，指导3同一天展开流式细胞会奥义(CD25反染)和细胞会因子研究。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同指导。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE抑止调升(b)。(c,d) CD25抑止调升(c)和CD134抑止调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中都的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

得借助于结论：我们得借助于的得借助于结论是，来自快速的发展子的酪氨酸无意识CD4+Treg在GITR表示中都给与了扩充和多样化，合理化了进一步研究工作Treg在1型式心血管疾病风险社会群体中都的互补的更进一步。

原文原文：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28