Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的操作过程中逐渐扩展

从第一次再次不止现肝细胞自身免疫到再次不止现1型式白血病临床征状的的发展率在成年人末期就有很好的刻画，多个肝细胞自身免疫阴性的成年人中会有70%在血清转换后10年内患上白血病，而随访15年的成年人这一%减低到84%。值得注意，%临床1型式白血病一半以上的型式1型式白血病的发病机制还并未获取充分的研究课题。

越来越多的人开始适用分期系统来定义1型式白血病的的发展：变异在再次不止现多种肝细胞自身免疫时转回第1过渡阶段，再次不止现低血糖异常时转回第2过渡阶段，再次不止现征状时转回第3过渡阶段。一些多发肝细胞自身免疫阴性的变异，在1期和2期，的发展较慢，并发展为发病的1型式白血病。我们之前刻画了一一组在首次检查到多种肝细胞自身免疫样本后至少10年无白血病的变慢的发展者，这一组征状数量少，但形态近于其明确。随后，我们发掘出肝细胞自身蛋白质特异性CD8+T巨噬细胞反应在的发展快速的征状中会大体上不存在，但在近期发病和长期存在的白血病征状中会很容易检查到。这显然表明，与的发展征状相比之下，这些征状自身免疫反应的抑制增强。

早期研究课题表明，尽管抑制性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但白血病征状存在一些功能局限性，其中会仅限于对IL-2的反应能够增大。此外，白血病征状中会的物理现象CD4+T巨噬细胞显然对抑制更具抵抗性，显不止为物理现象T巨噬细胞的抑制作用减弱，自然消除的Treg和肾脏消除的游离Treg，以及蛋白质经历的CD4+T巨噬细胞中会IL-2反应减弱。本研究课题的目的是刻画了CD4+抑制性T巨噬细胞(Treg)在一小群近于快速的发展者中会的形态，他们的年龄为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以人群为基础的中轴研究课题，在21岁以下复发的征状亲属中会检查1型式白血病的危险因素。我们之前刻画了长期快速的发展者的形态，他们始终保持多重肝细胞自身免疫阴性超过10年，但并未再次不止现白血病的临床征状，慢性或非同步进行性自身免疫。随后，10名再次始终保持无白血病并愿意备有大量血液样本的快速的发展者纳入T和B巨噬细胞功能系统性。在目前的研究课题中会，8名慢的发展者(SP一组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身免疫阴性。所有的行动者都东南面1型式白血病的发展的1期，尽管一些人随后得不到了肝细胞自身免疫对某些蛋白质的阴性反应，然而，一名征状已经东南面2期至少6年，但并未再次不止现临床征状，一名征状被诊断为白血病，该受试者72岁，在采集检查样本时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性中会对该NADPH同步进行了大体上上审核。分离外周血单个质子巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞法术和T巨噬细胞抑制作用试验审核NADPH中会Treg的频带、表型式和功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、比如说和回归)同步进行无指导聚类系统性，审核Treg表型式。

结果：与健康NADPH相比之下，来自慢的发展体的心灵CD4+T巨噬细胞的指导聚类看不止，激活的心灵CD4+ Treg频带减低，与糖皮质激素游离的TNFR相关蛋白(GITR)隐含减低有关。一名HbA1c消退的征状与的发展快速者和匹配的非常少相比之下，Treg对光略有有所不同。功能系统性表明，与健康NADPH相比之下，来自快速的发展体的Treg介导的CD4+物理现象T巨噬细胞抑制作用明显毁坏。显不止为对物理现象CD4+T巨噬细胞CD25和CD134隐含的抑制作用减低。

左图1 深入的表型式系统性看不止，CD4+Treg亚型式在慢的发展函数调用中会减低。由FlowSOM分解的Treg室，聚集在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标明物隐含深入研究不止10个元簇:心灵T巨噬细胞_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +心灵T巨噬细胞;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)适用9个有所不同Treg标明分解的10个元簇的MST。每个路由代表一个坦克部队(100个坦克部队)，大得多的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由一组周边上色。每个路由中会的饼左图坚称单个标明的隐含级别。(b)每个元聚类的热左图，以看不止全面性标明隐含。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)分解左图，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于稀土元素为每个metacluster盒直通左图(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP一组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T巨噬细胞(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T巨噬细胞(l)。粉红色圆圈代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 适用CITRUS的预测模型式证实，Treg频带的减低是的发展快速的图标。国际标准离子通道(a - f)和橄榄系统性(g-k)比较SP行动者和匹配的HD行动者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的代表性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含同步进行分离，模拟FlowSOM社会性。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)一组以及NADPHSP 606(粉红色)中会CD25+ cd127的频带汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道孙闭包的盒直通左图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，箭头引人注目的簇被鉴别为SP和HD函数调用之间的有所不同。(j)盒直通左图看不止了在SP(蓝点)和HD(灰点)一组中会，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相对于稀土元素(%)。(k)直方左图看不止每个簇的表型式(粉红色)和Treg标明相对于隐含与时代背景隐含(蓝色);上列，缓存Treg_3;下面四人，缓存Treg_4。时代背景与所有其他簇中会标明的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查

左图3 与健康献血者相比之下，的发展快速者心灵treg的GITR减低。每个心灵CD4+T巨噬细胞元簇(心灵T巨噬细胞_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +心灵T巨噬细胞;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个隐含标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的隐含热左图(sp606不仅限于在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中会所有HD(粉红色)、所有SP(蓝色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR隐含组合成，看不止直方左图(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检查，p< 0.07(粉红色)所有NADPH仅限于，p< 0.05(蓝色)NADPHSP 606和匹配的HD不仅限于在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR隐含，从国际标准离子通道，从所有HD(粉红色)、所有SP(蓝色)和SP 606(粉红色)组合成，看不止直方左图(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检查

左图4 来自快速的发展的CD4+ treg巨噬细胞压制物理现象CD4+T巨噬细胞的能够增大。SP一组用蓝色的直通和圆圈坚称，HD一组用黑色的直通和圆圈坚称，粉红色的直通/圆圈坚称NADPHsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标明为CFSE, Treg按检视的%滴定。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，人才培养3天后同步进行流式巨噬细胞法术检查。(a-d)与CD4+；也者相对于应的treg人才培养(骨髓)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用%-。适用阴性对照(激活的响应巨噬细胞分别为treg)计算抑制作用%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 物理现象CD4+T巨噬细胞对快速的发展的T巨噬细胞再生的抑制作用更寻常。SP一组用蓝色的直通和圆圈坚称，HD一组用黑色的直通和圆圈坚称，粉红色的直通/圆圈坚称NADPHsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标明，treg按检视的%滴定。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，人才培养3天后同步进行流式巨噬细胞法术(CD25反染)和巨噬细胞因孙子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用百分率(b)。(c,d) CD25抑制作用百分率(c)和CD134抑制作用百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中会的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得不止的结论是，来自快速的发展孙子的再生心灵CD4+Treg在GITR隐含中会获取了引入和丰富，强调了进一步研究课题Treg在1型式白血病风险变异中会的异质性的必要性。

原文不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28